Secondary Ab.의 conjugate enzyme으로 Horse radish peroxidase (HRP)와Alkaline phosphatase (AP)가 이용되며AP인 경우 효소활성이 phosphate에 의하여 저해를 받습니다.그래서 옛날 protocol을 보면 AP인 경우는 TBS를 , HRP인 경우는 TBS or PBS를 이용하라 되어 이었던 경우가 많습니다.